細(xì)胞增殖與細(xì)胞生長曲線實(shí)驗(yàn)(CCK 8/MTT/WST)
更新：2015-10-5 22:35:19 點(diǎn)擊：
介紹
細(xì)胞增殖與細(xì)胞生長曲線實(shí)驗(yàn)
細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性相關(guān)檢測服務(wù)
細(xì)胞增殖是生物體的重要生命特征，細(xì)胞以分裂的方式進(jìn)行增殖。單細(xì)胞生物以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的個(gè)體。多細(xì)胞生物以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的細(xì)胞，用來補(bǔ)充體內(nèi)衰老和死亡的細(xì)胞；同時(shí)，多細(xì)胞生物可以由一個(gè)受精卵，經(jīng)過細(xì)胞的分裂和分化，最終發(fā)育成一個(gè)新的多細(xì)胞個(gè)體。通過細(xì)胞分裂，可以將復(fù)制的遺傳物質(zhì)，平均地分配到兩個(gè)子細(xì)胞中去。
細(xì)胞增殖的研究方法有很多，主要包括：BrdU，EdU，CCK8，MTT等方法。其中測定細(xì)胞生長曲線是檢測細(xì)胞絕對生長數(shù)的常用方法，也是判定細(xì)胞活力的重要指標(biāo)，是細(xì)胞生物學(xué)特性的基本參數(shù)之一。一般細(xì)胞傳代之后，經(jīng)過短暫的懸浮然后貼壁，隨后經(jīng)過長短不同的潛伏期，即進(jìn)入大量分裂的指數(shù)生長期。在細(xì)胞達(dá)到飽和密度后，停止生長，進(jìn)入平頂期，然后退化衰亡。為了準(zhǔn)確描述整個(gè) 過程中細(xì)胞數(shù)目的動(dòng)態(tài)變化，典型的生長曲線可分為生長緩慢的潛伏期，斜率較大的指數(shù)生長期，呈平臺(tái)狀的平頂期及退化衰亡4個(gè)部分。以存活細(xì)胞數(shù)(萬／mL)對培養(yǎng)時(shí)間(h或d)作圖，即得生長曲線。生博公司目前主要使用MTT、CCK8和Am-blue三種試劑測定細(xì)胞生長曲線。
細(xì)胞增殖及細(xì)胞生長曲線實(shí)驗(yàn)
MTT檢測
MTT檢測以活細(xì)胞代謝物還原劑3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,
MTT噻唑藍(lán)為基礎(chǔ)。MTT是一種黃顏色的染料，活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲瓚，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比，從而可以對細(xì)胞的活力、增殖與凋亡情況進(jìn)行檢測。
CCK8檢測
CCK-8的原理跟MTT是相同的，不同之處在于CCK-8法生成的formazan是水溶性的，不需要再吸出培養(yǎng)液加入有機(jī)溶劑溶解這個(gè)步驟，因此可以減少一定的誤差，其重復(fù)性優(yōu)于MTT；且對細(xì)胞毒性小。
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